Vanliga frågor om centrifugalfilterenheter
Q1. Det är nödvändigt att separera proteiner med olika molekylvikter, så hur stor skillnad ska proteinernas molekylvikter behöva?
S: Storleken på de två proteinerna måste skilja sig 10 gånger eller mer.
Q2. Kan centrifugeraalfilteranordningar vara steriliserade och resistenta mot alkalisk tvätt?
S: Det kan steriliseras med 75 procent etanolvattenlösning och membranet tål 0.1-0.5N natriumhydroxid alkalisk tvätt.
Q3. Hur ska man hantera om proteinet fälls ut under koncentrationen?
S: Om proteinet koncentreras för snabbt eller för koncentrerat kan det orsaka proteinfällning, och den slutliga koncentrationen av proteinet efter koncentration bör inte vara för hög; Proteiner som är känsliga för koncentrationshastighet och tenderar att fällas ut, föreslagen förbättringsmetod:
Minska centrifugalhastigheten
Använd ultrafiltreringsmembran med en högre molekylviktsgräns
Blås och sug det koncentrerade röret och centrifugera sedan
Q4. Vad är den möjliga anledningen till attcentrifugalfilteranordningargår inte att centrifugera ner?
S: Du kan använda cirka 20 procent etanolvattenlösning för initial centrifugering om ultrafiltreringsröret inte kan centrifugeras, eftersom ultrafiltreringsmembranet är helt torrt, membranets yta är svagt hydrofob och flödet kan återställas efter infiltration med en låg ytspänningslösningsmedel.
Q5. Korrekt användningsmetoder och förvaring av centrifugalfilteranordningar
S: Centrifugalfilteranordningarna bör centrifugeras med renat vatten före användning för att verifiera dess integritet. Efter varje användning måste den förvaras i vått tillstånd för att förhindra att membranet torkar ut.
Q6. Hur tar centrifugalfilteranordningarna bort endotoxin?
S: De centrifugalfilterenheter vi tillhandahållit har inte behandlats med endotoxiner, och eftersom endotoxiner finns i stor utsträckning i naturen, kan prover som kräver endotoxiner förrengöras med 0.5N natriumhydroxid före experimentet och sedan tvättas med RO vatten för att avlägsna det mesta av endotoxinet.
Q7. När det koncentrerade proteinet används för nedströmsanalys visar det sig att det finns interferens, vad är orsaken?
S: Centrifugalfilteranordningarna kan förtvättas med buffertlösning eller renat vatten. Om interferensen fortfarande existerar, tvätta med 0.1N natriumhydroxid och tvätta sedan med renat vatten.
Q8. It visar sig att det inte finns något målprotein i koncentratet efter koncentrering. Vilka är de möjliga orsakerna?
S: 1) Den initiala koncentrationen av proteinet bör inte vara för låg, om koncentrationen är för låg kanske membranet inte kan behålla.
2) Välj lämplig membranporstorlek. Centrifugalkoncentrationen av filterröret hör till återvändsgrändfiltrering, och membranets porstorlek är i allmänhet mindre än 2 gånger eller mer än målproteinet.
3)Välj rätt centrifugalhastighet
4) Om målproteinet fälls ut
Q9. Passiveringsbehandling av centrifugalfilteranordningar
S: Passiveringsförbehandling av ytan på centrifugalfilteranordningarna kan minska adsorptionsförlusten av protein på membranytan, i de flesta fall kan förbehandling av kolonnen innan den utspädda proteinlösningen koncentreras förbättra återhämtningen, eftersom lösningen kan fylla den exponerade tomma proteinadsorptionsställen på membranet och ytan, passiveringsmetoden är att förblöta kolonnen med en stor volym passiveringslösning i mer än 1 timme, spola kolonnen noggrant med destillerat vatten och sedan centrifugera kolonnen en gång med destillerat vatten för att helt ta bort passiveringslösningen som kan finnas kvar på membranet, var noga med att inte låta membranet torka efter passivering, om du vill behålla det för framtida bruk måste du tillsätta sterilt destillerat vatten för att hålla membranet vått., vänligen kontakta våra ingenjörer för vanliga passiveringslösningar.
Q10. Filtrerar ultrafiltreringsmembranet molekylerna hierarkiskt?
A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 procent om man använder ett 100kd ultrafiltreringsmembran passerar dock molekyler som är mindre än membranets porstorlek inte helt fritt genom membranet. Den molekylära retentionshastigheten på 67 kd är mer än 70 procent, och proteinet på 43 kd är också mer än 40 procent avskuren, de olika komponenterna i en blandad lösning passerar genom membranet inte lika enkelt och lätt som en enkomponentlösning, i praktiken , om du vill isolera två makromolekyler bör molekylviktsskillnaden mellan dem vara åtta gånger eller mer.
Q11. Hur man effektivt separerar stora och små molekyler genom ultrafiltrering?
S: På grund av processens behov tas föroreningarna i makromolekylerna bort, eller de små molekylerna tas bort från makromolekylerna, det är normalt i produktionen. Det är mycket nödvändigt att välja lämplig membranporstorlek, filtreringsmetod och driftsförhållanden. Generellt sett, om MWCO-specifikationen för membranet väljs mellan de två proteinerna, kan en relativt ideal separation uppnås. Om proteinlösningen är relativt utspädd, kommer arbete under lågt tryck också att bidra till bättre resultat. Välj tangentiell flödesfiltrering och utför multipel diafiltrering för att få bättre separationseffekt.
