Membranteknik och vaccinförklaring (Ⅱ)
I den tidigare artikeln hade vi en preliminär introduktion till vacciner och strategier för klargörande av vaccin, och vi kommer att fortsätta att utforska dem i resten av den här artikeln. Efter det ovanstående kommer vi att fortsätta att dela vaccinförtydliganden och relaterade tillämpningar av membranvävnad.
2.2.2 Påverkan av virusets fysikaliska och kemiska egenskaper
Efter att ha övervägt produktionssystemet och metoderna för att ta bort de relevanta föroreningarna i klarningssteget är det viktigt att ta hänsyn till virusets egenskaper och fokusera på att maximera virusutbytet.
2.2.2.1 Enkel virusadsorption
Positivt laddade material och filterhjälpmedel (som kiselgur) har utvecklats för att förbättra djupfiltreringseffekterna. Även om den positiva laddningen ökar infångningen av nukleinsyror och HCP, är kiselgur känt för att binda cellrester och kolloider. Dessa material kan emellertid också hålla kvar viruset genom adsorptionsmekanismen. Eftersom viruset vanligtvis är negativt laddat i lösning kan elektrostatiska interaktioner med det positivt laddade filtret förekomma.
Virus kan också binda genom sina hydrofoba eller ospecifika interaktioner med vissa filtermaterial (som kiselgur eller glasfibrer). Höljeförsedda virus är, på grund av sitt lipidhölje, mer mottagliga för denna adsorption. Om viruset adsorberas till filtret genom elektrostatiska interaktioner och viruspartiklarna lossnar på grund av saltkonkurrens, kan viruset delvis återvinnas genom att skölja filtret med en starkt ledande buffert. Detta kan emellertid också eluera föroreningar såsom HCP eller nukleinsyror. Därför är användningen av ett alternativt filtermaterial, såsom den mer inerta polypropenen, föredragen.
Adenovirus is easily adsorbed, but different results have been confirmed. Using positively charged diatomite and deep filters. Borosilicate glass fiber filter material is also very well recovered. On the other hand, a patent proposed by Weggeman involving clarification of 20 – 40% adenovirus losses at PER, et al. Cell cultures were prepared with similarly positively charged deep filters containing diatomite. In this case, the nominal polypropylene filter showed a very high viral recovery rate (> 90%).
Det är välkänt att influensavirus är benägna att förlora adsorption under klarning. Därför är användningen av ett kostnadsfritt filter, det polypropenbaserade filtret, lämpligt för att klargöra influensasamlingen. Thompson et al rapporterade användningen av ett nominellt klassat 1,2 μm polypropenfilter följt av 0.45 μm PVDF-membran för att klargöra cellbaserat influensavirus producerat av MDCK-celler. Totalt nio reningstester utfördes i 20L-skalan, belastning 111 L/m2 för 1,2 μm polypropenfilter och 105 L/m2 för 0,45 μm PVDF-filter. Resultaten visade att majoriteten av de pågående virusen återhämtade sig bra (78-154%). De rapporterade också upp till 58 % avlägsnande av hcDNA, men inget signifikant HCP-avlägsnande.
2.2.2.2 Klippning av känsliga virus
Vissa virus (inkapslade eller icke-inkapslade) uppvisar låg mekanisk resistans och kan förstöras genom skjuvexponering under centrifugerings- och membranfiltreringsstegen. Skjuvkrafter som genereras under reningssteg som involverar filtrering eller kromatografi kan få det virala höljet att falla av, vilket påverkar smittsamheten. Beroende på kapsidens storlek, tjocklek och geometri kan den virala kapsiden vara spröd eller, omvänt, motståndskraftig mot höga tryck. Vissa inkapslade virus, såsom influensavirus, är elastiska mot mekanisk påfrestning och tål stora deformationer. Å andra sidan kan skjuvkraft orsaka att höljet av mindre resistenta virus, såsom retrovirus, faller av, vilket påverkar virusets infektivitet.
Extracellulärt genererade hölje-VLP: er är också mycket sårbara. Höga skjuvhastigheter genereras i centrifugalprocessen, huvudsakligen vid inlopps- och utloppsdelarna (höga skjuvhastigheter genereras vid gränsytan mellan gas och vätska). När viruset renades genom gradientcentrifugering försvagades transduktionsförmågan hos vissa retrovirus signifikant. Vid utformning av centrifugalseparation måste den relativa instabiliteten hos viruspartiklar till skjuvkrafter beaktas. Centrifugalkraften är inte den enda källan till skjuvchock, viktigare är utrustningens design, särskilt vid import och export har också betydande skjuvchock. Skillnader i utformningen av olika skalor kan leda till skillnader i utbyte och återhämtning av skjuvkänsliga virus i olika skalor.
Skjuvkänsliga virus bör utformas noggrant eftersom storleken på skjuvspänningen och tiden för exponering för spänningen (på grund av recirkulation) kan vara hög. För skjuvkänsliga virus föredras öppna kretsanordningar (ihåliga fibrer eller öppna plattor) för att minska turbulens och skjuvkrafter i matningskanalen.
Valet av driftsparametrar bör också minimera skador på viruspartiklarna: lågt tvärflöde, medelhögt transmembrantryck (TMP) och kort bearbetningstid.
Membrankontamination under högt tryck leder till förlust av viral smittsamhet, möjligen på grund av de krafter som skjuvverkan kan verka på virushöljet. Membranbaserad separation är baserad på storlek och ackumulering av virala inhibitorer och viruspartiklar med stor molekylvikt kan minska smittsamheten hos virala vektorer.
Nedbrytning av skjuvkänsliga virus under djupfiltrering är inte allmänt dokumenterad. Förlust av virus i djupfiltrering tillskrivs oftast infångning, adsorption eller tids- och temperaturberoende viral nedbrytning av produkten. Faktum är att även om mekanisk påkänning kan förekomma i NFF-system, är exponeringstiden för NFF-produkter för skjuvning mycket kort jämfört med andra teknologier på grund av den snabba enkelpassage som upplevs i NFF-produkter.
2.2.2.3 Intercept enligt bländarstorleken
Virus över 100 nm kan behållas genom att ta bort mykoplasma eller sterila membran (0.22 μm och lägre). I detta fall bör särskild uppmärksamhet ägnas åt valet av filter. För mikrofiltrerings-TFF-steg är 0.45μm eller 0.65μm membran att föredra för bra produktkanaler. För NFF-flerstegsfiltrering är det tätaste lagret större än eller lika med 0,45 μm. Försiktighet bör iakttas när du väljer ett djupfilter, eftersom vissa djupfilterenheter kan innehålla ett lager av film, vilket kan resultera i produktförlust från retentionsdrift. Virusaggregation påverkar virusproduktionen negativt och förbättrar virusretentionen på grund av virusstorleken.
Enligt ett patent av Andre och Champluvier kan homogenisering förhindra eller begränsa igensättning av filter genom att minska storleken på aggregatet, vilket ger ett högre utbyte. Homogenisering förbättrade också skördens filtreringskapacitet, som ökade med 2,4-3 gånger.
För mycket orenheter kan störa virusåterställningen. Föroreningar tenderar att täppa till filtret och tilltäppta membranporer kan leda till minskad viruspassagehastighet. I ett patent av de Vocht och Veenstra nämns att det direkta klargörandet av hög celldensitet Per. Samling med TFF({{0}}.65 eller 0.2 μm membran) resulterade i adenovirusfri virusåterställning. Återhämtning kan uppnås genom selektivt utfällningsborttagning av värdcells-DNA före 0,65 μm TFF-steget. 70 % av adenovirus.
2.3 Fallstudie: Optimering av klargörande av viralt vaccin
Vid den internationella konferensen om biologiska processer 2011 presenterade Sanofi Pasteur ett rationellt tillvägagångssätt för screening av filter för utveckling av nya förtydligade sekvenser för kandidatvirusvacciner. Forskningen syftar till att övervinna problemen med att optimera cell- och virusodlingsprocesser. Modifieringar av uppströmsprocessen resulterade i en 20 % utbytesförlust och för tidig filterkontamination under klarningssteget, vilket resulterade i ingen uppskalning. För att etablera ett robust och skalbart klargörande steg krävdes en fullständig omutveckling av filtersekvensen, med virusåtervinningshastigheter högre än 85 %.
Based on internal experience and scientific publications, the team selected 27 filters for an initial screening study. Small scale virus adsorption tests were performed on various filter media (polypropylene, nylon, cellulose ester, glass fiber, charged adsorption filter) and structures (pleated or deep filter). The virus yield was measured by ELISA and the clarifying efficiency of the preselected filtrate was compared by checking the reduction of turbidity. Preliminary screening studies showed that nylon and charged filters retained viral particles and virus recovery. Ten percent. The virus recovery rate of polypropylene and polyether sulfone filter was >. 80 %. Återvinningsgraden för cellulosaester och glasfiberfilter beror på utvärderingen av filtret (20 % eller 90 %).
Som ett andra steg utvärderade Sanofi Pasteur flera kombinationer (fas 2- eller fas 3-sekvenser) av de sju förvalda filtren i screeningstudien. Klassificeringstestet för konstant flöde utfördes med ett litet filter. Dessutom använde detta experiment ett högre utbyte än screeningstudien. Baserat på resultaten av virusåtervinning och filterkapacitet valde teamet de två bästa kombinationerna för vidare studier.
- Sekvens 1 (steg 2): 30 μm nominellt nominellt vikt polypropenförfilter, följt av ett kompositcellulosaester och flerskiktsfilter av glasfiber (1/0,5 μm porositet)
- Sekvens 2 (steg 3): samma förfilter (30 μm nominellt klassificerat polypropenfilter), följt av ett mellanliggande flerskikts polypropenfilter och slutligen en asymmetrisk polyetersulfonfilm.
The robustness of these two clarified sequences has been challenged by repeated constant flow sizing experiments with different harvest batches. While both potential sequences demonstrated enhanced capabilities compared to the reference sequence, only sequence 1 achieved virus recovery objectives (>85 %), som visas i figur 1.
Figur 1 Genomsnittlig virusåtervinning vid varje filtreringssteg. Stabilitetsstudier utvärderades för tre filtreringssekvenser, av vilka endast sekvens 1 med en 30 μm nominellt klassad vikt polypropen och en 1,0/0,5 μm cellulosaester och glasfiberfilter uppfyllde det globala återvinningsmålet .
Centrifugering utvärderades också som det primära klarningssteget, följt av slutfiltrering av {{0}}.45 μm. Flera hastighet/varaktighetspar testades. Även om filtreringshastigheten på 0,45 μm ökades med två gånger, var det slutliga utbytet lägre än målet på 85 %. Som ett resultat har centrifugering inte studerats ytterligare.
Slutligen utvärderades prestandan hos polypropen- och glasfiberfiltreringssekvenserna i en större skala (160 L bioreaktorstorlek). Filtersekvensen visas i figur 2.
Figur 2 förtydligar filterkombinationen och en grafisk representation av stegutbytet för strängen. Tåg A är den traditionella processen och tåg B är den optimerade processen. Den optimerade sekvensen B kan minska förfiltreringsområdet med 3 gånger, avbryta det mellanliggande filtreringssteget och minska det slutliga filtreringsområdet med 10 gånger, vilket ökar den globala virusåtervinningen med 3 %.
Flera partier klargjordes framgångsrikt utan tecken på filterblockering, processtid i linje med produktionsgränser och virusutbyte på > 85 procent. Optimering av förtydligandesteg hade ingen effekt på nedströmssteg och viktiga kvalitetsegenskaper hos vaccinet. Därför användes den valda klargöringssekvensen i vaccinproduktionsprocessen (bioreaktor i storleken 1000 L) och prestandan bekräftades framgångsrikt.
03 Klargörande av bakterievacciner
3.1 Överväganden för klargörande av bakterievacciner
Enligt Medical Thesaurus (2015) definieras ett bakteriellt vaccin som en suspension av utspädda eller dödade bakterier eller deras antigena derivat som används för att inducera ett immunsvar för att förebygga eller behandla bakteriella sjukdomar. Mer generellt kan bakterievacciner delas in i fyra underkategorier baserat på typen av aktivt antigen. Denna agent kan vara:
- Dödar eller försvagar hela den levande bakterien. Även känt som BCG-vaccinet.
- Rening av antigena determinanter (subenhetsvacciner). Mjältbrandsvaccin eller acellulärt pertussisvaccin.
- Bakteriegifter (toxiner). Difteri och stelkrampstoxoider.
- Plasmid (pDNA).
På grund av den breda heterogeniteten hos familjens produkter beror processutmaningar uppströms och nedströms till stor del på vilken typ av vaccin som produceras. Därför kan efter det initiala fermenteringssteget renas eller inte renas, så att klarningssteget kan utföras.
3.2 Strategi för klargörande av bakterievaccin
3.2.1 Toxoid
De två vanligaste toxoiderna som produceras för vaccinanvändning är difteri och stelkramp, som produceras av Corynebacterium diphtheriae respektive Clostridium tetani. Tillverkningen av båda vaccinerna är föremål för strikta myndighetskrav. WHO:s tekniska rapport och dess bilagor ger tydliga rekommendationer för att säkerställa kvaliteten, säkerheten och effektiviteten hos stelkramps- och difterivacciner. Allmän god tillverkningssed gäller för produktionen av båda vaccinerna, och anställda måste vara ordentligt utbildade och få boostervaccination mot båda sjukdomarna.
GMP kräver strikt att slutproduktens renhet och kvalitet måste påvisas. Enligt WHO och EP måste effekten av ett slutligt stelkrampsvaccin bestämmas genom jämförelse in vivo eller med någon annan beprövad metod med en lämplig referenssubstans kalibrerad i internationella enheter enligt den internationella standarden för stelkrampstoxoid. Uppdaterade krav på effekt publicerades 2011 och kan variera beroende på bedömningsmetod. Säkerheten (toxinfri och återställande toxicitet) för varje batch av vaccin måste också påvisas. Slutligen måste stabiliteten hos vacciner, särskilt i realtid, tas upp.
3.2.2 Plasmid-DNA-vaccin
Plasmid-DNA-vacciner används för djurhälsoändamål, och flera plasmid-DNA-vacciner för mänskligt bruk befinner sig i olika utvecklingsstadier och klinisk utvärdering. Efter E. coli-fermentering samlas bakterierna upp och klyvs för att frigöra plasmid-DNA.
Avlägsnande av cellrester åstadkoms vanligtvis genom centrifugering eller filtrering. Ämnet har behandlats mycket i de senaste publikationerna. I denna publikation, nuvarande uppströms, nedströms, och formulering pDNA processer och utmaningar.
Författarna ger också insikt i luckorna vid varje steg i den typiska pDNA-tillverkningsprocessen och potentiella framtida innovationer och/eller nuvarande tekniska luckor som kan leda till ytterligare processoptimering.
Plasmid-DNA-vaccin framställs i två steg. Först avlägsnas bakteriecellerna från odlingsmediet, och för det andra avlägsnas cellrester efter cellysen. Beroende på skalan samlas cellerna upp med hjälp av centrifugering eller TFF-mikrofiltrering. Skivstapelcentrifugen skjuts ut intermittent med hög hastighet, och utbytet av superlindade plasmider är dåligt på grund av skjuvskador under urladdning. Om centrifugering måste användas är en solid skål centrifug bäst. Platta TFF-enheter med öppen kanal med 0.1 eller 0.2 μm mikrofiltreringsmembran eller hålfiberenheter kan fungera bra.
Eftersom hålfiberanordningar har en hög fast lastkapacitet, prioriteras de ibland. Vanligtvis arbetar dessa processer med 3-5 gånger koncentrationen, följt av 3-5 volymer av transfiltrering. För att minska skjuvning och bättre kontroll av membranpolarisation rekommenderas penetrationskontrolloperationer starkt. Även om centrifuger är mer kostnadseffektiva i storskaliga kommersiella operationer, tenderar mindre skala processer att använda filtrering på grund av portabilitet och enkel drift.
Flockningsmedel har använts för att underlätta bearbetningen, men det kan leda till produktförlust. Vissa rekommenderar också att man använder inerta kiselgurpartiklar, följt av påsfiltrering.
Cell lysis produces viscous products, including large particles, cell fragments, soluble impurities, fine colloidal particles, and pDNA. Due to the complexity of the material, removing such fine solids is a difficult separation. Gradient density deep filter or open hole structure (>0.45m) membranfilter är bra på att ta bort cellskräp. På grund av den kraftiga igensättningen av cellskräp föredras lågflödes- eller lågtrycksfiltrering. Tff-baserade mikrofilter har använts för detta steg och påsfilter i industriell skala. Statisk (i ett blandningskärl) och kontinuerlig (med en in-line statisk mixer) sprickbildning kräver olika filter.
3.3 Fallstudie: Jämförelse av effektiviteten av centrifugering, NFF och TFF metoder för att klargöra stelkrampstoxiner
Muniandi et al. jämförde tre olika metoder för att klara stelkrampstoxiner och toxoider från fermenteringsvätskor, nämligen centrifugering, djupfiltrering (NFF) och TFF. Testmaterialet producerades i en 400L fermentor med användning av ett modifierat Miller-medium (MMM). I centrifugeringsstudien separerades cellerna från hjärtat vid 4000 RPM i en 6 x 1 L behållare under 60 min. Prover av supernatanten togs för att detektera toxoidåtervinning. Djupfiltrering använder 0,45 μm och 0,22 μm djupa filter som innehåller kiselgur och cellulosa för att klargöra jäsningsbuljongen. Processen utförs vid en temperatur på 35 grader och 12psi.
En öppen platt TFF-modul är termiskt bunden till ett 0.22μm PVDF-membran i TFF-metoden. Den TFF-baserade klarningsprocessen utfördes med en tvärflödeshastighet av 2000 L/h vid 23 grader, och det klarnade filtratet koncentrerades vid en tvärflödeshastighet av 1000 L/h vid 25 grader med användning av ett konventionellt TFF sandwich 30kD PES-membran. Den klarnade köttvätskan (ca 6L) koncentreras 10 gånger i denna ultrafiltreringsprocess. Tetanustoxoidtester utfördes på koncentrerade retainerprover för att bedöma produktåtervinning.
Djupfiltrering resulterade i en produktåtervinningsgrad på cirka 89 %, med TFF-enheter som resulterade i en produktåtervinningsgrad på över 97 %. Mikrofiltrerings- och ultrafiltreringsprocesser ger genomgående högre produktåtervinning än NFF-processen. Dessa resultat är baserade på flockningstester (Lf).
04Förtydligande av polysackaridvacciner
4.1 Övervägande av klargörande av polysackaridvaccin
Produktionsprocessen av både okopplade/fria polysackaridvacciner och kopplade polysackaridvacciner börjar med odlingen av värdbakterierna i en fermentor. I slutet av fermenteringen kan bakterier behandlas med rengöringsmedel som DOC(natriumdeoxicholat), Triton®X-100 eller andra lämpliga reagenser för att förstöra bakterierna och främja frisättningen av polysackarider. På grund av den stora batterikapaciteten är insamling direkt via NFF inte ekonomiskt genomförbart då genomströmningen kan vara mycket låg. Därför är det idealiska valet att använda en centrifug för att separera cellklumparna. TFF-mikrofiltreringsområdet kan också användas. Det cellfria centrumet/penetranten som innehåller polysackariden av intresse klargörs ytterligare av ett NFF-djupfiltreringssystem, följt av biobattered filtrering, och fortsätter sedan till nedströmsbehandling för ytterligare rening.
4.2 Strategi för klargörande av polysackaridvaccin
4.2.1 Första klargörandeproceduren
Centrifugering är en av de vanligaste teknikerna för att separera celler från fermenteringsvätskor. Beroende på skalan kan kontinuerlig centrifugering eller satsvis centrifugering väljas. Det är viktigt att notera att korrekt optimering av centrifugeringsförhållandena och deras funktion är avgörande för framgångsrik nedströmsrening. När du väljer ett specifikt TFF-membran och porstorlek är det viktigt att tänka på molekylvikten för polysackariderna, som ofta är stora och strukturellt komplexa, med molekylvikter som sträcker sig från cirka 500kDa till mer än 1000kDa. På grund av den stora öppna porstorleken kan användningen av 0,22μm, 0,45μm, 0,65μm MF-membran säkerställa framgångsrik återhämtning av PS-molekyler i den osmotiska lösningen.
4.2.2 Sekundärt förtydligande
Klarheten/grumligheten hos den cellfria jäsningslösningen som når det sekundära klarningssteget beror på de specifika bakterierna, klyvningstypen, individuell serumtyp och den teknik som används för det primära klarningssteget. Grumligheten i centrum kan variera från cirka 50 till 150 NTU. Ett positivt laddat djupfilter med fraktionerad densitet tillverkat av impregnerad kiselgur med fyllda cellulosafibrer kan användas för att klargöra och minska dess grumlighet till < 5NTU.
Volymgenomströmningen för detta djupfilter kan variera från cirka 150 L/m3 till 250 L/m3. Vanligtvis filtreras den klarnade produktlösningen genom ett efterföljande 0,45 μm biostödd reduktionsgrad eller 0,22 μm steriliserat membran för att avlägsna eventuella kvarvarande cellpartiklar, kolloider och potentiella mikroorganismer.
4.3 Fallstudie: Förtydligande av centrum för Streptococcus pneumoniae fermenteringsbuljong efter centrifugering
Cellerna separerades genom att tillsätta {{0}}.1% (v/v) typ 8 Streptococcus pneumoniae fermenteringsbuljong (20 L) genom kontinuerlig centrifugering. Mitten av samlingen filtreras genom två separata positivt laddade och kiselgur djupfilter innehållande cellulosafibrer. Det individuella djupa filterfiltratet filtrerades sedan genom ett bioladdat PVDF 0,45 μm membran av reduktionskvalitet. Alla filtreringstester utfördes i konstantflödesläge med peristaltiska pumpar. Filtreringstester med ett laddat djupfilter och Streptococcus pneumoniae serotyp 8 fermenteringsbuljong resulterade i att grumligheten sjönk från cirka 120 NTU till 3 NTU. Testerna utfördes med en flödeshastighet på 140 150 L/m2/h och en slutpunktstryckskillnad på 20-25 psi, med en volymgenomströmning på ungefär 180-200 L/m2.
Liknande filtreringstester utfördes på fermentationsbuljongen av Streptococcus pneumoniae serotyp 19A. Den centrifugerade 19A-vätskan klaras genom ett laddat djupfilter, vilket minskar grumligheten från cirka 40 NTU till 3 NTU. Testerna utfördes med en konstant flödeshastighet på cirka 140-160 L/m2/h, och en volymetrisk genomströmning av 200-230L/m2 uppnåddes vid ett slutpunktstryck på cirka 15 psi. HLPC-analys av produktprover som samlats in under filtreringsutvärderingstester visade ingen signifikant avkastningsförlust för djupfiltrering eller 0.45 μm (eller 0.22 μm) membran.
05 Slutsats
Utvecklingen av klarningsprocesser kräver integrering av flera enhetsprocesser såsom centrifugering, TFF-MF, djupfiltrering och aseptisk filtrering. Optimeringen av förtydligandeprocessen kräver förståelse för hur olika enhetsverksamheter påverkar varandra. Utmaningen är att välja teknik och verktyg (utrustning och fixturer) för att möta de allt mer komplexa kraven på processvätskor som produceras av dagens mer effektiva bioreaktorer. Ökningen av produktiviteten uppströms (viral titer, celldensitet, etc.), cellrester och cellysprodukter ökar svårigheten med klarningsprocessen och förvirrar valet av separations- och filtreringsutrustning.
Utrustningsdesign, användarvänlighet och renlighet bör beaktas vid val av processskala. Detta kommer att säkerställa effektiv konvertering och operatörssäkerhet vid hantering av kasserade filter. För att utveckla klarningsprocessen är en stark integration av klarningsstegen viktig för att säkerställa att bearbetningen av uppströmsskörden blir kostnadseffektiv. En rad filtreringsenheter är lätt tillgängliga för att underlätta laboratorietester, pilotproduktion och bearbetning i full storlek. Genom att implementera en väldesignad arbetsplan för uppskalning som utvärderar flera förtydligande alternativ, kan man med säkerhet välja och storleksanpassa förtydligande filter för att skydda nedströms enhetsdrift och samtidigt minska driftskostnaderna.
Vaccinförklaring innebär flera utmaningar. Vanligtvis måste filtreringsprocessen skräddarsys till produktionssystemet, inaktiverings- eller lyseringsmedlet och antigenpresentationen, inte nödvändigtvis vacciner. Traditionella vaccinprocesser använder vanligtvis centrifugering för att initialt klargöra vaccinet. Moderna vacciner med flera teknikplattformar och mindre bearbetningsvolymer gör vacciner mer lämpade för förtydligande med membranbaserade teknologier. Nyutvecklade vacciner som använder moderna cellinjer och uttryckssystem och använder mer definierade cellodlingsbetingelser gör många vaccinprocesser mer gynnsamma för filtrering.
Emellertid ökar heterogenitet i den antigena komponenten eller "målantigenet" hos vaccinprodukter komplexiteten för filtreringsklargöring. Antigener varierar i storlek, ytkemi och laddning. Dessa egenskaper påverkar utbytet och återvinningen av antigener. Vacciner ger unika utmaningar för klargörande, främst på grund av storleken på deras makromolekyler. Detta, i kombination med förmågasfrågor kring förtydligande, ökar behovet av vägledning om processutvecklingsstrategier.
Storleken och omfattningen av en verksamhet i kommersiell skala för vaccinproduktion har en betydande inverkan på valet av klarningsteknik. Eftersom den är belägen uppströms om processen, är korrekt klargöringsoptimering avgörande för framgången för nedströms enhetsoperationer, vilket maximerar utbytet, återhämtningen och robustheten i processen. Medan centrifugering fortfarande är ett hållbart tekniskt alternativ för primär klarning, vinner mikrofiltreringsenheter med öppna kanaler (TFF) för primär klarning och fina djupa filter eller membranfilter för sekundär klarning acceptans inom vaccinindustrin. Denna förändring drivs av behovet av snabbare bearbetning, snabb processutveckling, bärbara processer och engångsimplementeringar. NFF erbjuder en ekonomisk process som lämpar sig för små till storskaliga engångsalternativ. På grund av ändrade regulatoriska behov främjar tillgängligheten av pre-aseptiska gammabestrålningsanordningar eller moduler utformade för autoklavering snabbare anpassning av NFF- eller TFF-baserade teknologier.
Många klassiska vaccinprocesser involverar utvecklingen av klargörande enheters verksamhet, till stor del på grund av regulatoriska begränsningar och de associerade höga kostnaderna för förlängning och återinlämning eller kliniska prövningar. Plattformsprocessen som använder det filtreringsbaserade klarningsschemat har använts i stor utsträckning i flera biologiska medel med en hög grad av framgång. Exemplen och fallen som beskrivs i detta dokument visar att vaccintillverkare har potential att uppnå denna nivå av stabilitet, ekonomisk lönsamhet och engångsnytta genom att följa mallmetoden.
Andra fördelar med filtrering framför centrifugering är skjuvkänsliga virus eller virus som tenderar att ackumuleras vid luftgränsytan. I takt med att enhetstillverkare tar ut nya produkter på marknaden kommer vaccintillverkarna att fortsätta att vara bättre rustade för klargörandeprocessen.
Som det första företaget i lokaliseringskretsen har Guidling Technology samlat på sig tillräcklig relevant erfarenhet av vaccinförklaring. Guidling Technology är ett utvecklings- och produktionsbolag med fokus på bioläkemedel och cellodling, rening och separation. Produkter används i stor utsträckning inom biomedicin, diagnostik, industriell vätskefiltrering, detektion, klarning, rening och koncentrationsprocess; Guidling har framgångsrikt utvecklat ultrafiltreringscentrifugrör, ultrafiltrerings-/mikrofiltreringsmembrankassett, virusborttagningsfilter, tangentiellt flödesfilteranordning, djup membranstapel, etc., som helt uppfyller tillämpningsscenarierna för biofarmaceutisk och cellodling.
Våra membran och membranfilter används i stor utsträckning vid koncentrering, extraktion och separation av förfiltrering, mikrofiltrering, ultrafiltrering och nanofiltrering. Vårt breda utbud av produktlinjer, från små laboratoriefiltrering för engångsbruk till filtreringssystem av produktionstyp, sterilitetstestning, fermentering, cellodling och mer, kan möta behoven för testning och produktion.
