DEAE svag anjonbytesmembrankromatografi

DEAE Weak Anion Exchange Membrane Chromatography – Produktintroduktion

 

1. Översikt

DEAE svag anjonbyteskromatografi är en reningsteknik baserad på skillnader i laddningsegenskaper och laddningstäthet hos olika biomolekyler. Eftersom de flesta biomakromolekyler innehåller funktionella grupper såsom karboxyl- eller hydroxylgrupper, kan deras laddningsegenskaper och storlek justeras genom att modifiera buffertlösningens pH. Efter att biomolekyler binder till ett motsatt laddat anjon- eller katjonbytarmedium, uppnås separation genom att ändra jonstyrkan eller pH i den mobila fasen. Molekyler med svagare bindningsaffinitet elueras först, följt av de med starkare bindningsaffinitet, vilket ger effektiv separation

 

2. Produktfördelar

2.1 Hög effektivitet: Uppnår stark bindning vid flödeshastigheter som är upp till 40 gånger högre än hartsbaserad-kromatografi. Jämfört med traditionell packad-bäddkromatografi förkortar membrankromatografi den totala processtiden med cirka 30–40 gånger.

2.2 Hög bindningseffektivitet: Membrankromatografi uppvisar hög bindningskapacitet och hög flödeshastighet under lågt tryckfall, vilket gör att laddade biomolekyler kan fångas i en enda passage genom kolonnen.

2.3 Skalbar och flexibel: Hela serien av membrankromatografiprodukter kan möta olika reningsbehov av biomakromolekyler, som täcker alla stadier från processutveckling till stor-produktion. Kapselns -strukturkonstruktion stöder både engångs-bruk och återanvändning efter rengöring.

2.4 Förbättrad produktivitet: Den kompakta designen minimerar anläggningens fotavtryck. Genom att eliminera kolonnpackning, rengöring, rengöringsvalidering och kolonnlagringsprocedurer kan systemet drivas direkt efter buffertjämvikt utan kolonnpackning eller lagring. Arbetskostnaderna kan sänkas med upp till 50 %.

 

3. Tekniska parametrar

3.1 Konstruktionsmaterial

	laboratorieskala	liten skala	pilotskala	produktionsskala
Membranvolym	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Membranstödstruktur	Polypropen (PP)
Membranhus	Polypropen (PP)
O-ring	Silikon

3.2 Driftegenskaper

	laboratorieskala	liten skala	pilotskala	Produktionsskala
Membranvolym	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Rekommenderad flödeshastighet	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12L/min	25-150L/min
Maximal drifttemperatur	35 grader
Maximalt drifttryck	3 bar (25 grader)
Maximalt differenstryck	3 bar (25 grader)
Lagringsförhållanden	20%乙醇水溶液 20% vattenlösning av etanol

Figur 1. Förändringar i laddningskapacitet för membrankromatografi efter flera användningar övervakade med BSA.

Dessutom utvärderade vi borttagningseffektiviteten av värdcellsproteiner och nukleinsyror med hjälp av DEAE-membrankromatografi. Resultaten är följande.

	DNA				HCP
	IgG-återställning	Innehåll (pg/mg av IgG) med RT PCR		Borttagningsfaktor	Innehåll(ng/mg av IgG) av Elisa		Borttagningsfaktor
Sikt	%	Innan DEAE-membranet	Efter DEAE Membrane	Logga	Innan DEAE-membranet	Efter DEAE Membrane	Logga
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Tabell 1. Avlägsningshastigheter för DNA och värdcellsproteiner från CHO-uttryckt IgG med hjälp av DEAE-membrankromatografi.

En serie experiment visade att Q-membrankromatografi effektivt kan avlägsna föroreningar, samtidigt som en hög återvinningshastighet av mål-IgG bibehålls.

Dessutom jämförde vi Gudiling membrankromatografi med importerade märken, och lastkapacitetsdata är som följer.

Figur 2. Laddningsprestanda för olika proteiner på vår membrankromatografi och konkurrerande produkter

En övergripande utvärdering visar att vår lastkapacitet är jämförbar med den för importerade produkter.

Figur 3. Prestanda för DEAE-membrankromatografimodulen vid kollagenproteintestning

Med hjälp av DEAE-membrankromatografimodulen visade valideringsresultat att de flesta målkollagenproteiner kunde fångas in och elueras med 135 mM NaCl.

Genom testning under olika elueringsförhållanden fann vi att membrankromatografi och agarosgelkromatografi uppvisar liknande elueringsbeteende, där proteinrenheten varierar avsevärt under olika saltkoncentrationer. I praktisk FoU och produktion är det nödvändigt att kvantitativt bestämma de optimala jämviktselueringsförhållandena för att erhålla målproteiner med hög -renhet.

 

4. Klassiska applikationsfall

Avlägsnande av DNA, virus, värdcellsproteiner och endotoxiner

Infångning av plasmider, virus, nukleinsyror och proteiner, samt rening av oligonukleotider

 

5. Driftarbetsflöde

5.1:Förberedelse och montering av utrustning

5.1.1 Membrankromatografimodulen ska installeras på AKTA-kromatografisystemet på ett sätt som liknar packade hartskolonner, vilket säkerställer att flödesriktningen är i linje med pilarna och inloppsriktningen. Anslut med Luer-kopplingar eller klämbeslag.

5.1.2 Ställ in inloppsflödet till 5–10 MV/min och använd utjämningsbuffert för att tömma luft. Fortsätt att skölja tills inga bubblor observeras vid utloppet, anslut sedan permeatutloppet till kromatografisystemet

5.2:Före-behandling

5.2.1: Ställ in inloppsflödet på 5–10 MV/min och utför för-förbehandling med 0,5 M NaOH i mer än 5 MV för att säkerställa att membranet når jämvikt.

5.2.2: Under samma flödeshastighet, ytterligare för-förbehandla med jämviktsbuffert (1× PBS) i mer än 5 MV för att säkerställa att membranet når jämvikt.

5.3 Kromatografiprocess

5.3.1

Ställ in inloppsflödet på 5–10 MV/min och för-behandla med jämviktsbuffert i mer än 5 MV tills membranet når jämvikt.

5.3.2

När provet har förfiltrerats genom ett 0,22 μm filter laddar du provet tills laddningen är klar eller kromatografins laddningskapacitet har uppnåtts.

5.3.3

Tvätta med jämviktsbuffert i mer än 10 MV tills UV-absorbansen minskar till baslinjenivån.

5.3.4

Använd gradienteluering eller linjär eluering enligt processdesignen och samla in prover i fraktioner efter behov.

5.4,CIP Post-behandling – CIP för membrankromatografienhet

5.4.1

Ställ in inloppsflödet på 5–10 MV/min och utför rengöring-på-plats (CIP)-behandling med 0,5 M NaOH i mer än 10 MV tills UV-absorbansen sjunker under baslinjen.

5.4.2

Efter cirkulerande tvätt i 30 minuter, byt till vattentvätt tills pH är mellan 7–8, fortsätt sedan rengöring med 20 % etanol tills konduktiviteten förblir nästan konstant.

5.5, lagring av membrankromatografi:

Efter användning och slutförande av CIP kan membranmodulen tas bort och lagras genom blötläggning i 20 % etanol, eller förvaras online i rumstemperatur i 20 % etanollösning. 20 % etanollösningen bör inspekteras och bytas ut med jämna mellanrum.

 

6.Beställningsinformation

DEAE-typ svagt anjonbytesmembrankromatografikapselfilter

	Laboratorie-skala	liten skala	Pilotskala	Produktionsskala
Produktmodell	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Membranvolym	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Populära Taggar: deae svag anjonbytesmembrankromatografi, Kina, leverantörer, tillverkare, fabrik, grossist, bulk, i lager, gratis prov